A technológia oltótenyészetet a tejsavbaktériumok
TECHNOLOGY oltótenyészet előállítására a laktobacillusok
IV Tikhonov, Yu Ovsyannikov, VG KOMOSKO, SA Svédország VE regények
FSEIHPE „Moszkvai Állami Egyetem Állatorvos és Biotechnológiai elnevezett KI Szkrjabin "
Az elmúlt években volt egy erőteljes romlása a járvány és a járványos helyzet az Orosz Föderáció. Egy arányának növekedése a Diszbakteriózisi, amelyek miatt a környezeti degradáció, ellenőrizetlen használatának antibiotikum az állatgyógyászatban és különböző kemoterápiás szerek, hormonok, stb valamint stressz tényezők és feltételek, csökken a minőségi ivóvíz és takarmány.
Úgy véljük, hogy a vitathatatlan dysbacteriosis a mezőgazdasági állatok és madarak széles körben, mivel annak hiányában a időben történő megszüntetésének normomikroflory nagyon valószínű, hogy dolgozzon nekik nehéz, visszatérő fertőző betegségek, immunhiányos állapot, különböző allergopaty, vérszegénység, gyomor-bélrendszeri és egyéb betegségek, köztük elmaradás Prywes , csökken a termelés hatékonyságát.
A nagyrészt kezeletlen dysbacteriosis veszélyes a fiatalok és az reproproduktivnogo sertéstelep állatok és madarak. A növekedés a fertőző betegségek bakteriális, vírusos és egyéb etiológiájú nagymértékben uralja az alacsonyabb nemspecifikus rezisztencia az állatok és madarak ™ organizmus miatt kifejezett dysbiotic megsértése.
A kapcsolat a fenti, a megelőzés és a kezelés a fertőző betegségek és dysbacteriosis mezőgazdasági állatok és madarak a pillanatban, és a közeljövőben prioritások állatgyógyászatban. Ezek megoldása akkor lehetséges, ha a végrehajtás egy sor fontos anti-járványügyi intézkedéseket, beleértve a fejlesztési, a sorozatgyártás és az új terápiás és profilaktikus szerek megelőzésére és kezelésére a fertőző betegségek és disbacterioses, amelyek megfelelnek a modern, nemzetközi szabványoknak. Ebben az esetben nagyon fontos, hogy biztosítsák a rendszer hatékonysága ezen intézkedések megfelelő és egységes módszertan alkalmazásával megfelelő terápiás és profilaktikus készítmények. Azok viszont, szükségessé előkészítése, elfogadása és hogy egy széles körű állatorvosi szakemberek információs és módszertani és referenciadokumentumokért a fenti kérdésekre.
Nyilvánvaló, hogy szükség van, hogy elmélyítse a munka a probléma a probiotikumok a szempontból is az új mikroorganizmus-törzsek probiotikus akció, a meglévők fejlesztése és az új típusú gyógyszereket azok hatékonyságának növelése érdekében.
Tekintettel a kis számú publikáció eubioticheskom hatásával tejsavbaktériumok a hazai szakirodalomban tényleges tanulmányok a mechanizmusok azok antagonista hatásúak és a körülmények a megőrzése, fenntartása és amplifikálására hasznos tulajdonságait. A kapott eredményeket szolgálhat alapul a korszerű, nagy teljesítményű probiotikumok alapuló tejsavbaktérium állatgyógyászati célokra.
A folyamat során a végző tudományos kutatás ezen a területen van szükség, hogy azonosítsa a törzsek tejsav baktériumok, hogy maximális képes elnyomni a fejlesztés a bélben oldódó, gennyes és kolipatogennyh mikroorganizmusok, megvizsgálja a mechanizmus azok antagonista hatása, a feltételeket a fenntartására és megőrzésére törzsek. Meghatározni az optimális arányt kiválasztott törzs a terméket, hogy dolgozzon ki egy Eljárás a drog, feltéve, hogy a szükséges teljesítményt és végezzen a tárgyalás haszonállatok és baromfi.
Az irodalom vizsgálata a kiválasztási mikroorganizmusok és a technológiai fejlődés megszerzésére irányuló kábítószer amelyek probiotikus aktivitással és azok használatáról tette, hogy meghatározza a főbb kutatási területek:
- keresés és értékelése biológiai tulajdonságait az új mikroorganizmus-törzsek probiotikus hatása van;
- fejlesztés azok alapján járó termény;
- fejlesztése előállítási módszerek és karbantartása a referencia és a munka kultúrák termesztett törzseivel mikroorganizmusok probiotikus hatása van;
- fejlesztés a folyékony közeg, biztosítja intenzív akkumláció laktobacillusok során periodikus dinamikus homogén mély művelés;
- tanulmány minták baktérium populáció növekedése mellett aerob és anaerob körülmények között;
- kiválasztása optimális paraméterek elmerült a mikroorganizmusok tenyésztéséhez probiotikus lépéseket annak érdekében, hogy megőrizzék a biológiailag hasznos tulajdonságokkal;
- A készítmény kifejlesztése a hatóanyag egy probiotikus alapuló kereset tejsavbaktérium-törzs, esetleg kombinációban más baktériumok;
- Pontszám replikálódóképessége technológia élelmiszer-készítmény probiotikus hatása van;
- tanulmány a speciális biztonsági és a gyógyszer toxicitását laboratóriumi állatokon;
- ellenőrzés hatékonyságának felhasználásával probiotikus által kifejlesztett egyesület a gyakorlatban az állattenyésztés és a baromfitenyésztés.
Anyagok és módszerek. Mi használt törzsek mikroorganizmusok Lactobacillus nemzetséghez tartozó (Lactobacillus plantarum №3 és Lactobacillus buchneri №4) gyűjteményéből növények Kutató Intézet Mikrobiológiai az Orosz Föderáció.
Termesztésére lactobacillusok, hogy értékeljék a biológiai tulajdonságaik elő tápközegben alapuló média MPC-1 és az IFA-4 eljárásnak megfelelően meghatározott a FS hogy „Tejsavbaktérium száraz”.
Vetés munkakultúra tejsavbaktériumok kaptuk egy sor a még száraz hivatkozási Crop standard táptalaj MRS. Az utolsó lépésben állítjuk elő agar tenyészet öblítse krioprotektáns, majd fagyasztás és tárolás -20 ° C-on
A termesztés lactobacillus végeztük 20 literes palack egy folyékony IFA-1 táptalajt. A tenyészeteket Lplantarum L.buchneri palackok és nőtt az időszakos mély művelés levegőztetés keverés nélkül hőmérsékleten (37 ± 1) ° C-on 48 és 72 óra.
Kontroll tápközeg végeztük fiziko-kémiai és biológiai indikátorokat.
A tanulmány eredményei. Hogy előkészítse oltócsírából kultúrák lactobacillus törzseket használjuk svezhepereseyannuyu referencia törzsek Lactobacillus tenyészet MRS táptalaj. Erre a hurok választottak baktériumtelepek izoláljuk a szilárd táptalajon MRS, fiziológiás sóoldatban szuszpendáljuk, és átoltjuk MRS folyékony közegben az injekciós üvegben. Crops inkubáljuk hőmérsékleten 36 38 ° C-on 48 órán át. A leves-tenyészeteket ezután átoltjuk rá a matrac ferde szilárd táptalajon IFA az arány 5,0 ml kultúra egyik matrac. Termények matracok hőmérsékleten inkubáljuk a 36. 38 ° C-on 48 órán át a törzs L.plantarum 3 és 72 óra törzs L.buchneri 4. Az inkubációs periódus után az agar tenyészetet használunk, hogy készítsen egy működő oltótenyészetet. Ebből a célból a ROE kialakítva mikrobiális gyepen mossuk 10,0 ml 1,5% -os oldatot poliglyukina.
Tekintettel a magas biokémiai aktivitása lactobacillusok, hagyományos recept védő közegben fagyasztással (szacharóz zselatin) nem lehet használni a számunkra. Ebben a tekintetben, azt már alkalmazzák egy semleges és megfelelően tanulmányozott krioprotektiv polyglukin.
Az elkészített mikrobiális szuszpenzió polyglucin szétosztjuk 5 ml-es ampullákba, és -20 ° C-on
Az értékelés eredményeit a túlélési laktobacillus törzsek összetételére a frissen bevetett és tartjuk munkakultúrák táblázatban mutatjuk be. 1.
Az adatok elemzése a táblázatban mutatjuk be. 1, azt jelzi, hogy a mikrobatenyészet Lactobacillus törzsek a készítményben a kiválasztott partner hidegkárosodásgátló kellően nagy ellenállás a fagyasztás és tárolás -20 ° C-on A legtöbb élő mikrobák felvettünk egy hónap tárolás használt tenyészetek fagyasztott állapotban. A jövőben a munka, szoktuk a termés munkakultúrák, -20 ° C-ig b hónapig.
Jellemzői frissen készített és -20 ° C-on elvetett munkakultúrák lactobacillus törzs (X ± Ig5, n = 5)
Alapján a jellemzők és a beadás módjától, a probiotikus akció állatgyógyászati szükségesek előállítására szolgáló technológiát a készítmény a hatóanyag, amely lehetővé tenné, hogy megtartja legalább egy éves magas antagonista aktivitást és savképző képessége, hogy ártalmatlan, kényelmes használat. A vizsgálati eredményeket a laktobacillusok törzsek a baromfiiparban, során kapott tanulmányok kimutatták, hogy a minimális koncentráció az élő Lactobacillus sejtek a kész formában a készítmény legyen legalább a ZhYu9 ml.
Egy adott koncentrációja terápiás és profilaktikus készítmények a technológia tartalmaznia kell egy sorozat egymást követő lépések halmozódó elegendő biomasszát laktobacillusok. A technológiai folyamat biomassza felhalmozási munkakultúrák termesztett kutatás állt a következő szakaszokból áll:
- I oltótenyészet előállítására passzálással;
- II oltótenyészet előállítására passzálással.
A táblázatban szereplő adatok. 1 azt mutatják, hogy a Lactobacillus baktériumok a készítményben stabilizált fagyasztva kultúrák kellően magas túlélési, és biztosítja a szükséges koncentrációt kapjunk oltótenyészetet I passzálással.
A passzáljuk inokulum tenyészetek I. munkakultúrák lactobacillus felolvasztás után fiolákba átoltjuk szilárd növekedési tápközegen ferde MRS-4 matracok. Crops inkubáljuk hőmérsékleten (37 + 1) ° C-on 48 órán át. A koncentráció a tejsavbaktériumok Az oltótenyészet végzett számlálással meghatározzuk sejteket egy Goryaev kamrában.
Meghatározás eredményei lactobacillus koncentráció oltótenyészetet passzálással I táblázatban mutatjuk be. 2.
2. táblázat
A sejtkoncentrációt tenyészetekben a tejsav baktériumok termesztett matracok I átoltással ferde agar