Jellemzők dolgozni egy steril laboratóriumi

Amikor dolgozik a tiszta szobában laboratóriumi, mind a munkavállalók meg kell felelnie a bakteriológiai laboratórium alábbi üzemeltetési szabályok, amelyek biztosítják a sterilitást, a munka és megakadályozzák az esetleges előfordulása belüli fertőzések:

1. Minden személy, aki a laboratóriumban kell overall, tartalék cipő (vagy cipő kiterjed), fehér sapka vagy kendő.

2. A helyiség tilos az evés, dohányzás, élelmiszerek tárolására.

3. Nem lehet a laboratóriumi idegen dolgokat.

4. Tilos túllépni a laboratóriumi köpenyt, vagy viseljen kabát a szőrzet.

5. Minden dolgozónak kell használni csak a munkahelyen.

6. Minden műveletet kell elvégezni a szabályok betartásának Sterilitás: steril, minden munkát elvégzett, közel a láng, transzfúzió a fertőzött folyadékot termelt mint a tálca egy fertőtlenítő oldat, stb ...

7. Meg kell, hogy szigorúan ellenőrizzék a tisztaság kéz: a munka után a fertőző anyagok fertőtlenítése. A munkahely a nap végén rendbe és alaposan fertőtleníteni.

8. A berendezés teljes érintkezésben van egy fertőző anyag lehet sterilizálni, vagy ártalmatlanítani.

Biotechnology cég tisztán kell tartani. Érdemes rendszeresen végeznek egészségügyi tisztító laboratóriumi felszerelés. Adjon teljes sterilitás a laborban nagyon nehéz, és ez nem mindig szükséges, de jelentősen csökkenti a mikroorganizmusok számát a levegőben, és számos felületen laboratóriumi helyiségek lehetséges. Ezt úgy érjük el gyakorlati alkalmazása fertőtlenítési módszerek, azaz a megsemmisítése fertőző ágensek a környezeti tárgyak.

A termesztés steril palánták kell használni lamináris box, amely ültetési explantátumokat a táptalajhoz szennyezés nélkül mikroorganizmusok által.

Minden felület Laminaria kezeljük 96% -os alkohollal, sterilizált eszközök, anyagok, a növényi anyagot az asztalra helyezünk, és tartalmazza Laminaria UV-sugárzás. 20 perc elteltével kapcsolja ki az UV és tartalmazzák bioszűrők. A munka lamináris box viselni steril köpeny és sapka, kéz kezelésére 96% -os alkohollal. Csipesz, szikék és preparirovalnye tűt tartalmazó főzőpohárba helyeztük 96% -os alkohollal. Mielőtt minden manipulációs eszközök égetjük alkoholban lámpa lángja. Abban az esetben, megsértése sterilitás környezetben jól fejlett mikroorganizmusok (gombák, baktériumok), amelyek megsértik a közeg összetétele és elnyomja növényi növekedést explantátumokat.

Edények, köpenyek, gyapot, a papír, desztillált vízzel, tápközeget sterilizáljuk autoklávban gőznyomás alatt 1-2 atmoszféra, és a hőmérsékletet 120 ° C-on 20-60 percig, attól függően, hogy a térfogata retorta anyag.

Kulacsok, áll a környezettel, gyapjú, papír, köpenyek sterilezés előtt celofánba csomagolva papír vagy helyezzük Bix.

Fém eszközök nem lehet autoklávban, mint az intézkedés alapján keletkező gőz rozsda. Ezért, sterilizálva vannak száraz hővel termosztátok hőmérsékleten 170-250 C-on 1-2 órán át.

Lab № 1

Témát. „A szervezet és felszerelések biotechnológiai laboratóriumi munka szabályait benne”

Anyagok és berendezések:

Főzőpoharak (50, 100, 250 ml), támogatja a csövek, eszközök (csipeszek, szikék, olló, tűk preparirovalnye), detergensek (mosópor), kálium-bikromát, nátrium-hipoklorit.

1. Olvassa el a készülék biotechnológiai labor.

2. Irányítása alatt a tanár, hogy megtanulják a működési elvek az autokláv, sütő, lepárló és egyéb kiegészítő berendezések.

3. Edények áztatott nátrium-hipoklorit-oldatok alaposan mossuk detergens (mosószer), öblítsük le folyóvízzel 8-10 alkalommal, helyezze 4-6 órán át kálium-bikromát (a kénsav és kálium-dikromát), meleg vízzel mossuk, majd kétszer desztillált.

4. Tiszta ware tegye a sütőben 2 órán át 100-130 ° C-on

5. Az edényeket szárítsuk tárolására közel gyapot dugó, fólia, celofán.

Tesztkérdések a téma 1.

1. Hogyan működik a biotechnológiai labor?

2. Hogyan sterilizálja táptalaj, kerámia, desztillált víz, eszközök?

3. Hogyan működik a sterilizálás laboratóriumi felszerelés?

3. A fajta és előkészítése táptalajon

3.1. Típusai táptalaj és értékelje a készítmények

Attól függően, hogy a növény fajtájától kell vizsgálni, mint egy szilárd anyag (agarized) és folyékony táptalajon. Néha folyadékok azért előnyösek, mert a nagyobb mobilitás trofikus elemek. Például, ha a reprodukálás a rózsák sikeresebb volt tenyésztjük a hajtásokat egy kétrétegű közeg: alsó réteg - agar, felső - folyadék. A reprodukcióra hatékonyságát is befolyásolhatja a helyét a explantátum (vízszintes vagy függőleges), a típusa dugók (gyapot, műanyag, üveg, fém, stb), valamint az arány a térfogat és a explantátumok táptalaj optimális megvilágítás és gázcsere explantátumok.

A kompozíció a táptalaj kell kiválasztani minden típusú növény. A Mikroszaporítási befolyásolja a hormonok, ásványi anyagokat, vitaminokat és szénhidrátokat tartalmaznak. A szorzás in vitro gyakran Murashige és Skoog közeg, Gamborg, Heller és mások. Általánosan használt Murashige-Skoog táptalajt (MS), amely tartalmaz egy csomó szervetlen nitrogént, amely serkenti az organogenezis és szomatikus embriogenezis. Kérdés optimális arány NH5 - NO3 nyitva marad, mint az irodalmi adatok alapján igen ellentmondásos és egyetemes recept minden fajta növény van. Mivel a szén-dioxid-tápforrás segítségével különböző szénhidrátok, például szacharóz, glükóz, fruktóz, galaktóz. Különböző növények igényelnek a különböző koncentrációjú szénhidrátok különböző szakaszaiban mikrotenyésztési.

A tápközeg összetevőinek a növényi sejtek és szövetek lehet osztva hat fő csoportra, amely rendszerint tükrözi a sorrendben a készítmény a koncentrált törzsoldatokat: makrotápanyagok, mikrotápanyagok, vas forrás, vitaminok, szénforrások, növényi hormonok.

Az alapja minden táptalajok tenyésztésére növényi explantátum keveréke ásványi sók. Ez nitrogénvegyület formájában nitrátok, nitritek, ammónium-sói; foszfor - formájában foszfátok; kén - formájában szulfátok; valamint oldható sói K +, Na +, Ca ++, Mg ++. Vasat alkalmazunk formájában kelátok [FeO4 vagy Fe2O4 + EDTA (etilén-diamin-sav) vagy annak nátriumsója Na-EDTA (Trilon B)] - a legtöbb könnyen hozzáférhető formában mastering növényi szövetekben.

Nitrogén, foszfor és a kén része a szerves vegyületek, fehérjék, lipidek, nukleinsavak. Vas, cink, mangán, molibdén, kobalt kombinálva porfirinek képező makromolekulák fotoszintetikus pigmentek (klorofill), redox enzimek (a kataláz, peroxidáz, polifenoloxidáz). Következésképpen, az összes ilyen vegyületek teljesítenek a sejtekben és szövetekben szerkezeti funkciója. Ugyanakkor az ionok K +, Na +, Ca ++, Cl -, H + szükséges szabályozó pH-értékű környezetre és fenntartani fiziológiai sejt gradiensek (turgor, ozmotikus nyomás, polaritás).

Mivel a szén-dioxid-forrás biológiai makromolekulák, valamint tenyésztjük heterotróf szövetek (kallusz és szuszpenziók) a tápoldatot adtunk szénhidrátok koncentrációban 20-60 g / l. Általában ez a diszacharid (szacharóz), monoszacharidok (hexózok: glükóz és fruktóz, pentóz: xilóz és mások). A poliszacharidok nem használt táptalaj. Csak bizonyos típusú szöveteit (tumor) tartalmazó hidrolitikus enzimek, termesztik keményítőt tartalmazó táptalajon, raffinóz, cellobióz.

Ahhoz, hogy serkentik biokémiai reakciók a sejtben alkalmazott biológiai-paraméter katalizátorok - B-vitaminok (B1, B6, B12), C (aszkorbinsav), PP (niacin) mezoinozit.

Tiamin (B1) része a piruvát-dekarboxiláz részt az átalakítás a szénhidrátok. Tiamin-pirofoszfát része a enzimek oxidatív dekarboxilezése ketosavak (piroszőlősav és ketoglutársav) egy koenzim transzketoláz.

Piridoxin (B6), mint egy fosfornrkislogo észter része az aminosav dekarboxilezést, transzaminálás, és enzimek.

Niacin (PP) formájában egy amid egy része NAD és a NADH-dehidrogenáz katalizálja a donor-akceptor lánc H + (H + visszavonása a molekulák a szerves anyagok).

A folyamatszabályozás morfogenezis szövettenyészetben szükségesek a biológiai növekedés és fejlődés szabályozók - fitohormon. Ezek az anyagok befolyásolják a differenciálás és dedifferenciálódásához a sejtek és szövetek, kezdeményező hisztogenezisében indukálják a sejtosztódás és a nyúlás, részt vesznek az öregedés folyamatát és érés, vagy serkentik vagy gátolják az növekedés és fejlődés a sejttenyészetek, képződését okozhatja a padlón. A biotechnológiai kutatások egyre nagyobb mértékben használják a hormonok, amelyek serkentik a növekedést és a fejlődést: auxinok, citokininek, gibberellineket.

Auxinok: IAA - indolil-3-ecetsav, IMC - indolil-3-vajsav NAA - naftil-ecetsav, 2,4-D - 2,4-diklór-fenoxi-ecetsav.

A citokininek: kinetin - 6-furfurilamino, zeatin, NN-difenil-karbamid, 6-BAP - 6-benzil-amino.

Gibberellinek: giberrellovaya sav.

Ami biológiai adalékanyagokat elsődleges kallusz indukciós alkalmazhatunk növényi kivonatok (10-15% a teljes mennyiség a közepes): kókusztej (folyadék kókuszdió endospermium), kivonatok éretlen kukorica mag (előnyösen során a tejet szakasz), amelyek citokininek - Kinetin és zeatin (6-szubsztituált aminopurines) és NN-difenil.

Az in vitro tenyésztést alkalmazunk és folyékony agarized (szilárd) közegben. A folyékony közeg termesztésére használt szuszpenziók, bőrkeményedés, izolált szervek és szövetek, regenerált növények. Ugyanakkor, hogy fenntartsák az explantátumokat csövekbe a közeggel feltöltött speciális híd-támogatást szűrőpapír vagy szintetikus porózus anyagok.

Agar táptalaj alapján készített agar-agar - poliszacharid alkotó algák, amely gélt képez vízzel pH 5,6-6,0. Néha, mint egy tömítés és helyettesítő agar poliakrilamid gélek (Bio Gel) P10 és P200.

A mesterséges táptalajon és makro- mikrosoley megoldások előre elkészített és ismételten felhasználható. Ez a méh (koncentrált) megoldásokat. Ezek tárolása speciális körülmények között: makro- és mikrosoli hűtött konténerek bedugaszolt 0 ... + 4 ° C-on; vitaminok, fitohormonok, enzimek, növényi kivonatok - -20 ° C-on kis hajók 5-10 ml dugóval (penitsillovye fiolákban).

Az anyalúgokat makrosoley általában kiváló teljesítményt koncentrációban 10-40-szer mikrosoley - 100-1000-szer, vitaminokat - 1000-szer.

Solutions phytohormones kívánatosan elő közvetlenül a felhasználás előtt dolgozó környezetekben.

A készítmény a makro- és mikrosoley anyalúgot Minden sót feloldjuk egy külön főzőpohárban melegítés, majd dekantáljuk, és a térfogatot. A lehűtött elegyet hozzáadjuk mikrosoley utolsó molibdén-sók, és makrosoli - magnéziumsók oldatot (hogy elkerüljük a csapadék).

Törzsoldatokat a kelát kalcium-klorid és a vas (vas-szulfát + EDTA vagy EDTA Na - Trilon B), állítunk elő, és elkülönítve tárolják más sókat.

Koncentrált vitamin oldatokat a következőképpen állítjuk elő: 10-szeres mintát feloldunk 10 ml desztillált vízben külön-külön.

Növényi hormonok - anyagok, amelyek rosszul oldódnak vízben. Ezért, 100 mg előre feloldjuk kis mennyiségben (0,5-2,0 ml) alkoholt (auxinok, gibberellinek), 0,5-1 N HCI vagy KOH (citokininek), majd teljes oldódásig melegítjük (kivéve abszcizinsav és kinetin ) és hozott 100 ml térfogatra (1 ml, amely 1 mg anyagot).

Recept alap táptalaj használható a mikroszaporítási

modern technológiai rendszerek a gépgyártásban. A főbb rendelkezéseit, a szövetségi oktatási szabvány az irányt készítmény 220.700, képesítés (diploma) - Bachelor.

Az alapvető oktatási program

fegyelem kialakulását hallgatók általános kulturális meghatározott kompetenciák irányába osnovnoyobrazovatelnoyprogrammoypo 020.400 0,62 »Biology« minősítés »Bachelor. Uchebnayadistsiplina« Botanica „ciklus A cél a fegyelem formában.

151.000,62 technológiai gépek és berendezések. Profil képzés „Food Production gépek és készülék.” Képesítési (fok) végzős BA -.

Kapcsolódó cikkek

előző ◈ a következő