Kutatási módszerek in Microbiology
Vannak az alábbi alapvető módszerek: mikroszkópos, mikrobiológiai, tapasztala-mentális, immunológiai.
1.Mikroskopichesky - a tanulmány a mikrobák festett és festetlen (natív) állam segítségével különböző típusú mikroszkópok. A módszer lehetővé teszi, hogy meghatározza az alakja, mérete, elhelyezkedése, és a szerkezeti elemek kapcsolatos színezni a mikrobák. Előfordul, hogy a jellegzetes morfológiai jellemzői meg tudja határozni, hogy milyen típusú mikroba (gombák, protozoonok, bizonyos baktériumok).
Kísérleti (biológiai) - szennyeződés a mikrobák által laboratóriumi állatokban. A módszer lehetővé teszi, hogy:
izolálni tiszta baktérium kultúrák, gyengén növekvő táptalajon;
felfedezni a kórokozó tulajdonságait a mikroba;
részesülő immunbiológiai gyógyszerek különleges megelőzés, diagnózis és kezelés.
4. immunológiai (a diagnózis fertőzések) - a tanulmány a válasz a fogadó specifikus reakciók érintkezve baktériumokat.
Válaszul kézhezvételét mikrobiális részecskék (antigének, Ar) immunrendszer létrehoz egy specifikus fehérje-molekula - antitest (AT), amely képes létrehozásáról adatok en Tigeneh egy specifikus kölcsönhatást a komplexképzés AH + AT. na kimutatjuk az ilyen komplexek alapú módszer. Különböztesse 2 féle módszerek: szerológiai módszerrel és allergiás módszer. Szerológiai módszer alapja az AT kimutatására a vérben vagy más testfolyadékokban, ismert mikrobiális AG (diagnosztika). Allergiás módszer alapja kimutatására túlérzékenység (allergia), hogy újra adja meg a mikroorganizmus allergén (AH). A jelen levő immunválasz (AT vagy az allergiák) jelzi az előző ülés e mikroba: talán a férfi beteg volt egy megfelelő in fektsiey korábban beoltották, vagy rosszul abban a pillanatban.
Gyakran AG komplexképzést ismert + AT meghatározza a formáját a tiszta tenyészet az ismeretlen mikroba kapott a vizsgálat alatt mikrobiológiai módszerrel (azonosítható fut-Katsiya antigén szerkezet).
Morfológiája és fiziológiája mikrobák mikroszkópos vizsgálati módszer
• Világos mikroszkóp egy merülő rendszer
Hogy tanulmányozza a mikrobák mikroszkóp alatt igényli a növekedés körülbelül 1000-szer. Ezért, immerziós mikroszkópok a rendszer által használt ( „merítés” - merítés) A kompozíció a bemerítés rendszer tartalmaz egy merülő objektív (x 90), valamint a merítés olajat kapunk, amely a hézagot a vizsgált tárgy és a frontlencse az immerziós objektívvel. Amint a törésmutatója az üveg és az olaj közel vannak, ez megakadályozza, hogy a fénysugarak miatt kilökődés, és így hozzon létre egy optimális megvilágítását a látómező. Opcionálisan-koncentrációk az eltérés a fénysugár, és azért is, mert rendkívül kis átmérőjű az objektív első az immerziós objektívvel. Ha a mikroszkóp szükséges megjegyezni, hogy a lencsék „száraz rendszerben” nem azt jelentette, hogy kell meríteni az olaj, ami okozhat számukra, hogy értéktelen. Mikroszkóp merülő rendszer lehetővé teszi számunkra, hogy tanulmányozza a mikrobák öltek Oak Rushen állapotban (alakja, mérete, a relatív pozíciója, a szerkezet a baktérium-stand-nek), és megkülönböztetni az egyiket a másiktól mikrobákat.
Az a képesség, a baktériumok festett különböző módszerekkel említett színező tulajdonságok.
Egyes esetekben (a tanulmány morfológiája gombák, protozoonok és más, viszonylag gabona-CIÓ létesítmények az élő, festetlen állapotban) fénymikroszkóppal sötétebb látómező (célkitűzések x 40 vagy 8 db) mikroszkópos, preparátumokat „zúzott csepp” vagy „függő csepp”.
Tanulmány a morfológiai jellemzőit mikrobák (hosszúság, szélesség, alak) gyakran végezzük, hogy meghatározzuk a faj. Mérések sejtes mikroorganizmusok változhat frakciók mikrométer (mikron, 10 -6 m), hogy több tíz mikrométer. Kis bakteriális sejtek, amelyek méretű 1-2, nagyobb 8-12 mikron vagy több. A méréseket a szemlencse-mikrométerrel (beépítve a szemlencse egy átlátszó vonalzó).
• Darkfield mikroszkóp (ultramicroscope)
A jellemzője ennek a mikroszkóp a jelenléte a sötétlátóteres kondenzátor (kondenzátor-paraboloid), amely koncentrátumok egy fénysugár, és elküldi azt az oldalán a tárgy alatt tanulmány. Tekintettel arra, hogy a közvetlen sugárzás van vágva a központi membrán hűtővel és a ferde sugarai kilépő kerületén a rekeszizom, nem tartoznak bele a lencsét ultramicroscope sötét látótérben. Amikor megvilágított ferde sugarak az élő és élettelen részecskék beleértve mikrobák, néhány kifejezést-ray belép a lencse; míg van egy fényes izzás részecskék a sötét háttér előtt. Temnopolnuyu mikroszkópiát tanulmányozására használták mobilitásának mikrobák, megfigyelés nagyon vékony tárgyak (spirocéta) előállítására „zúzott szalma.”
Ez a fajta fénymikroszkópos lehetővé teszi számunkra, hogy tanulmányozza a szerkezete élő, festetlen baktériumok (átlátszó objektumok). Amikor a fény áthalad a nem festett mikrobiális sejtek, ellentétben a festett, az amplitúdó a fényhullámok nem változik, de csak az ő fázis változása, hogy nem lehet kimutatni az emberi szem. A fáziseltolódás során fordul elő a folyosón lan-nek nagyobb optikai sűrűség (riboszóma nukleoid). Speciális eszközök: fázisok hűtővel és célok fázis gyűrűk lehetővé teszik átalakítására láthatatlan fázisváltások át látható amplitúdó.
A működési elve a mikroszkóp alapul iumineszcenciajelenség. ISO-térképezés objektumok kezeljük fluorokrómok, amelyek, ha besugározzuk az izgalmas-to-hullámhosszú része a spektrum színes fény hosszabb hullámhossz (zöld, narancs, stb). A fluoreszcens mikroszkóp tanulmányozása élő és halott mikrobák (a „száraz” vagy merítés rendszerek). Fluoreszcens mikroszkópia egy elütő színű-nek a képet felismerni kisszámú csírák, tanulmányozzuk szerkezetét és kémiai együttes egyre használt immunfluoreszcens módszer.
Ez az eszköz eltér a fénymikroszkópok lényegesen nagyobb felbontású spo-lities (0,001 mm) segítségével fény helyett elektronsugarat, hanem verem optikai lyannyh - elektromágneses lencse. Az elektronmikroszkópos vizsgálat vírusok, makro-ultrastruktúrát megölték.
Főzés előkészítése mikroszkópos vizsgálat
Gram-festés.
1. lépés - előkészítése kenet.
Az üveg slide tüzelésű gázláng égőket. Wax ceruzával jelölje meg a határait jövő stroke kör átmérője 1-2 cm. És letette a poharat az asztalra. Hidrogén-loop-kalcinált alkalmazott a középső kör kis csepp steril izotóniás nátrium-klorid oldattal (IPC). Akkor ez a csökkenés készült kis mennyiségű baktérium kultúrák tscha-telno emulgeáljuk és terjesztésére egy vékony réteg körön belül. Keneteket Bouillon Cul-kör nélkül előállított előburkolásához IPC.
Stage 2 - szárítás.
Glass maradt a levegőben, amíg eltűnik a nedvesség.
3. szakasz - rögzítő.
A rögzítés végzik annak érdekében, hogy megöli a baktériumokat, csatolja az üveg és növeljék hajlamot színezékek. Rögzítő slide (löket-up) három Stick dyval láng 2-3 másodpercig időközökkel 4-6 másodperc. Keneteket a genny, vér, köpet, ödéma folyadék áztatással rögzítettük a rögzítő folyadék (aceton, a keveréket Nikiforov cél). Ez megakadályozza, hogy fixálás bruttó deformációk a kutatás tárgyát.
4. lépés - színező.
Vannak egyszerű és összetett (differenciáló) festési módszerekkel. Egyszerű módon lehetővé teszi, hogy megítélje a mérete, alakja, elhelyezkedése és elrendezése sejteket. Kifinomult spo-Søby lehetővé mikrobák szerkezetének megállapítására és gyakran a nem egyenlő bánásmód a paint-lam. Egy példa egy egyszerű módja szolgálhat fukszin elszíneződés (1-2 perc), metilén-kék vagy kristályibolya (3-5 perc), és a komplex - Gram-festés, Romanowsky-Giemsa, Ziehl-Neelsen.
Differenciálás módszer Rook
Festés után ezzel a módszerrel néhány baktérium festjük sötét lila színű (Gram-pozitív Gy +). mások - bordó színű (Gram, Gr). Ennek lényege a módszer abban áll, festés, hogy Gy + baktériumok szilárdan rögzített készlete genciánibolya és jód, nem elszíneződését etanolt. Gr baktériumok fehérítés után dokrashivayut bíbor.
G + coccus baktériumok
Gr - baktériumok coccusok