Kézikönyv a gyakorlati készségek a hallgatók hallgatók a Department of Hisztológia
Módszertani kézikönyv a gyakorlati készségek a hallgatók hallgatók a Department of Hisztológia.
A Hisztológiai Tanszéken szerzett gyakorlati készségek
A különböző lencsékkel végzett mikroszkóp technika: x8, x40, x90.
A szövettani készítmények leolvasása
A szövettani rajz technikája
A hematoxilin - eozin hisztológiai festés technikájának elsajátítása
Elemogrammok és grafikon-logikai struktúrák elemzése.
A mikrokészítmények szövettani szerkezeteinek diagnosztizálása
Az emberi perifériás vér kenetének leolvasása és a leukocita képlet számítása.
A vizsgált szövettani készítmény protokolljának összeállítása.
profilalkotás
A Fogorvostudományi Tanszék hallgatói különbséget tesznek a fogkrémek mikrokészítményein.
A gyermekgyógyász diákjai: különböző korcsoportok gyermekének perifériás vérének feltárása.
A mikroszkóppal való munkavégzés szabályai
Helyezze el a mikroszkópot kényelmes helyzetbe és válassza ki a fényforrást
Húzza a mikrovint a munkahelyzetbe, az állvány bal oldalán lévő pontnak a két kockázat középpontjában kell lennie
Helyezze a kis nagyítási lencsét 8-as pozícióba, forgassa a revolvert óramutató járásával megegyező irányba.
A felső kondenzátor lencséjének egyenletes megvilágítására egy konkáv tükör használatával.
Ellenőrizze, hogy a látómező egységesen világít-e a mikroszkóp szemlencse alatt.
Helyezze a készítményt a mikroszkóp szakasz tetejére
Helyezzen be egy kis nagyító lencsét 0,8-1,0 cm távolságra a kábítószertől, mikor csavarozza be. A szem irányítása alatt egyértelmű képet kap
Állítson nagy nagyítási objektívt 40-re a középső pozícióban a revolver óramutató járásával megegyező irányba történő forgatásával
A kép tisztaságának elérése mikrocsavarokkal (2-5 fordulattal) történő munkavégzéssel, gyakrabban a magadon, ritkábban a magától.
Amikor a munka megtörtént, tolja a revolvert egy nem munkakörbe, és távolítsa el a hatóanyagot.
Egy hisztológiai minta olvasása A szövettani mintából származó protokoll protokollja egy magán szövettől
A gyógyszer neve
A készítmény színe (hematoxylin-eosin, orsein, hematoxylin stb.)
A szerv struktúrájának elve
I Layered-shell:
Hüvelyek száma;
Az egyes héjak neve;
Hólyagok rétegei a generátorok szövetének nevével. Adja meg a szövetek morfológiai jellemzőit ennek a szervnek a rétegeiben. Ismertesse a szövetek eredetét
Egyéb szerkezetek a héjréteg (prosztata, vér- és nyirokerek, ideg fatörzsek, intramurális ganglionok nyiroktüszők harafkternyh jelezve morfológiai jellemzőit.
II Parenchymal
Kapszula - az anyag megnevezése,
Trabekula - az anyag megnevezése,
Vérerek (artériák, vénák), idegtáblák, intramurális gargles.
2. parenchima
Hívja a szövet típusát, amely a parenchimális szerv alapját képezi (epitheliális, retikuláris)
Neve és leírják az alapvető szerkezeti egységek parenchyma (például nefronban, nyiroktüszők, elválasztjuk szekréciós mirigy, epiteliális szálak acinus it.d.) vagy fő részből parenchyma (például fehér és vörös pulpa a lép, kéreg és a velő, zónák)
Az emberi perifériás vér kenetének leolvasása és a leukocita képlet számítása
A humánvér színének feltárása Romanovszkij módszerével
Learning azonosítani vörösvérsejt vérkenet-eritrocita viszonylag állandó átmérőjű (7,5mkm) nem tartalmaz atommagok, eozin színű rózsaszín (oksifilen) detektáltunk a közepén egy kis megvilágítás miatt elvékonyodása.
Megtanulják felismerni a fehérvérsejtek, a vörösvértestek nagyobb méretűek, van egy magja, ezek sokkal kisebbek, mint a vörös vérsejtek. Find stab nagy nagyítás, segmenoyadernye, polimorfonukleáris leukociták, eozinofinye, bazofil granulociták, limfociták, monociták.
A vérlemezkék megtalálása és meghatározása, 2-3-szor kevesebb, mint a vörösvérsejt, általában csoportokban gyűjtik össze.
A leukocita képlet számítása
Számolni kell 100 leukociták növekedésével, meghatározva azok egy vagy másik csoporthoz való tartozását a korábban vizsgált sejtek szempontjából. Annak érdekében, hogy ne számoljon ugyanabban a szakaszban, egyszerűen kézzel az alábbiak szerint, a kábítószert a színpad csavarjaival kell mozgatni, vagy
A hematoxilin és eozin szövettani festésének technikájának elsajátítása
1.1. Fénymikroszkópia
1.1.1. Mikroszkóp eszköz
1.1.2. Hisztológiai készítmény előállítása
1.1.2.1. Az anyag átvétele és rögzítése
1.1.2.2. Az anyag víztelenítése és tömörítése
1.1.2.3. Szeletek készítése
1.1.2.4. A készítmények festése és a tartósítóközeg lezárása
1.1.3. A szövettani készítmények festésének módszerei
1.1.3.1. A festékek típusai
1.1.3.2. Általános színező módszerek
1.1.3.3. A kötőszövet nem sejtes szerkezetének azonosítása
1.1.3.4. A kötőszövet és a vér sejtjeinek festése
1.1.3.5. Az idegrendszer elemeinek azonosítása
1.2. Elektronmikroszkópia
1.2.1. Az elektronmikroszkóp elve
1.2.2. A készítmény jellemzői
A hisztológia, a citológia és az embriológia számos kutatási módszert alkalmaz.
Itt csak a halott (rögzített) sejtek és szövetek fény- és elektronmikroszkópos vizsgálatához kapcsolódóakat tekintjük.
1.1. Fénymikroszkópia
1.1.1. Mikroszkóp eszköz
1. Séma - fénymikroszkóp szerkezete.
A mikroszkóp 3 rendszert tartalmaz -
optikai,
világítás és világítás
mechanikus.
1. Az optikai rendszer objektívvel és szemlencsével rendelkezik.
a) Lens (1) - lencsék rendszeréből kell beilleszteni a cső (2) alulról és közvetlenül a tárgyra (így - a neve).
A szokásos objektív nagyítása:
8. 20. 40 (száraz cél), 90 (merülő lencsék).
Ha az utolsó lencsét használja, akkor egy csepp cédrus (merülő) olajba kell meríteni, amelyet a gyógyszer fedőlapjára kell vinni.
b) A szemlencsét (3) felülről behelyezzük a csőbe. A szemlencse egyre növekszik
7, 10, 15.
c) A kapott mikroszkóp nagyítása a lencse és a szemlencse nagyításának eredménye, például:
2. Világítási rendszer - fényforrás, tükör, kondenzátor és membrán.
a) A fényforrás (4) beépíthető a mikroszkópba, és a mikroszkópon kívül is elhelyezhető (pl. hagyományos asztali lámpa).
b) A tükör (5) sugárzást gyűjt a forrásból, és az alulról felfelé irányuló készítményt irányítja.
A tükör egyik felülete sík, a másik homorú;
ez utóbbit mesterséges megvilágításban használják.
c) A kondenzátor (6) lencsékből áll, amelyek a fényre fókuszálnak. A kondenzátor emelésével és csökkentésével (csavarral) beállíthatja a sugarak élességét.
d) a membrán (7) a kondenzátorba van szerelve; Ez egy olyan rendszer, amelynek átlátszó lapjai közepén egy lyuk van.
Ez korlátozza a fényáramot a gyógyszerre.
Nagyméretű nagyító lencsék használata esetén csökkenteni kell a nyílásnyílást - csökkenteni a gömb alakulását.
3. Mechanikai rendszer - cső (2), állvány (8), oszlop (9) és szakasz (10).
a) Az oszlop makro- és mikrometrikus csavarokkal van összekötve, amelyek felemelik és
Engedje le a csövet, hogy az objektum képét a megfigyelő retinájára fókuszálja.
A makrocsavart alacsony nagyításnál használja, miközben a mikrocsavart nagy nagyításban használják.
b) Az objektumtáblázat vízszintes síkban mozoghat, amely lehetővé teszi a látómezőbe eső kábítószerek területének megváltoztatását.
Ennek eredményeképpen a fénysugarak haladnak a következő úton:
fényforrás (4) tükör (5) kondenzátor (6) membrán (7)
gyógyszerlencse (1) cső (2) szemlencse (3).
Ie a mikroszkópiát átvilágított fényben végezzük, amelynél a gyógyszer elég vékony.
Vegye figyelembe azt is, hogy a mikroszkóp az objektum inverz képét adja.
1.1.2. Hisztológiai készítmény előállítása
1. A szövettani készítmények következő típusait a megmunkált anyag jellege különbözteti meg:
a) szervek szekciói (5-15 nm vastagságúak),
b) kenetek (vér, csontvelő stb.),
c) filmek (peritoneum, soft dura mater) vagy teljes készítmények
A szeleteket leggyakrabban használják.
2. A gyógyszer előkészítése általában a következő négy lépést tartalmazza:
a) az anyag felvétele és rögzítése,
b) az anyag kiszáradása és tömörítése,
c) szakaszok,
c) a készítmények festése és tartósító közegben történő lezárása.
1.1.2.1. Az anyag átvétele és rögzítése
1. az adott szerv vágni kis darabokra (0,5 x 1 x 1 cm-es), és merítsük őket a rögzítőelemet (formaldehid, a metanol, stb) - rendszerint 24 órán át.
2. A rögzítés a szövetek autolízisének (öneloszlásának) megakadályozására szolgál. Ezt fehérjék denaturálásával (koagulációval) érjük el.
3. A rögzítés után a mintákat több órán keresztül folyó vízzel mossuk.
1.1.2.2. Az anyag víztelenítése és tömörítése
1. A mintákat ezután tömörítik, hogy a jövőben mikrotomokra vághatók.
Gyakran paraffint vagy celloidint használnak tömítőanyagként.
2. Az előzetes minták dehidratáltak (egyébként a hidrofób tömítőanyag nem tud behatolni a szövetbe).
a) Ehhez "alkoholt" töltenek alkohollal -
70%. 80%. 96%. 100% etanol -
minden alkohollal 24 órán át.
b) Mert a paraffin oldhatatlan és etanolban a mintákat ezután etanol-xilol és tiszta xilol elegyében oldjuk.
3. a) Öntés: Helyezze a mintákat xilol-paraffin, majd folyékony paraffin keverékébe
1-2 óra hosszat 52-56 ° C-on.
b) Paraffint adnak, lehűtik, megkeményítik; Vágja ki a blokkot a mellékelt mintával és rögzítse egy fából készült kockára.
1.1.2.3. Szeletek készítése
1. A kockákat egy speciális eszközbe - egy mikrotomába - helyezzük el a szekciók előkészítéséhez.
2. a) A mikrométeres mechanikai rendszer segítségével az objektum tartó és a kocka együtt mozog minden egyes lépésnél egy bizonyos távolságon (pl. 10 μm).
b) A paraffinblokk felületére merőlegesen irányított mikrotomkés levágja az adott vastagság vékony testrétegét (vágását).
3. A részeket a meleg víz felszínére helyezzük elterjedésükre, majd - a csúszkán.
1.1.2.4. A készítmények festése és a tartósítóközeg lezárása
1. A festés előtt a mintákat feloldják a paraffinból, és oldószeres oldószerben vezetnek:
xilol, alkohol 100%, 96%, 80%, 70%, 60%, víz (2-5 percenként)
(Ez a sorozat vízzel végződik, ha vízoldható festéket használnak.)
2. A festéshez a szeleteket tartalmazó diákat rövid időre helyezzük el
a festékoldatba, vízzel mossuk és egy másik festék oldatával kezeljük
(ha használják is), és ismét vízzel mossák.
3. A hatóanyag ismét dehidratálódik (növekvő koncentrációjú alkohollal együtt),
majd felvilágosítást (karbol-xilol és xilol) - a felesleges festék eltávolítására.
4. Végül egy csepp kanadai balsamot (vágás esetén) alkalmaznak a gyógyszerre vagy
cédrusolajat (vérekenések esetén) és fedjük le a fedőlapot.
Így a hisztológiai készítmény elkészítése nagyon hosszú és
munkaigényes eljárás.
De a helyes végrehajtása a termék lehet tárolni határozatlan ideig hosszú ideig.
1.1.3. A szövettani készítmények festésének módszerei
1.1.3.1. A festékek típusai
A szövettani technikában használt valamennyi festék 3 típusra oszlik.
3. Az elektronmikroszkópban a sugarak útja elvben ugyanaz, mint egy fényben.
a) Az elektronforrás a katód (1),
és a hajtóerő a potenciálkülönbség a katód és az anód között (2).
b) Az anód a katód közelében helyezkedik el, és közepén egy lyuk van, amelyen keresztül az elektronok áthaladnak.
c) Annak érdekében, hogy folyamatosan megmaradjon az áramlásuk, nagy vákuum keletkezik a mikroszkópcsőben.
4. a) Egy elektromágneses tekercs (3) kondenzátorként szolgál (a mintákat a mintán (4) összpontosítja),
b) a második tekercs (5) - mint cél (a mintából eltérõ sugarakat kap),
c) és a harmadik tekercs (6) - szemlencsével vagy vetületi lencsével.
5. Az utolsó tekercsen áthaladó sugarakat, majd továbbhaladjon a lumineszcens képernyőre (7), és ezáltal az elektronok esése helyén villogni kezd.
1.2.2. A készítmény jellemzői
Az anyagot nagyon apró darabokban (1 mm3-es sorrendben) veszik fel,
és a rögzítést általában 2 lépésben végezzük:
a) Kezdetben glutáraldehid (fehérje stabilizálás),
b) azután - az ozmium-tetroxid (foszfolipidek és kontrasztos szövetek stabilizálása).
2. Tömítőanyag
1. A mintákat, szokásos módon, dehidratálják,
és epoxigyantákat használnak a tömörítéshez.
2. a) A forrasztás különleges formában történik,
b) a keverék megszilárdulása termosztátos polimerizációjával történik,
c) és a megkeményedett tömbök úgy néznek ki, mint a kis gyertyák.
1. A vágás ultrahang segítségével történik;
vastagságuk 30-50 nm (összehasonlítva a mikrotomikus részekkel - 10 000 - 20 000 nm).
2. Ezután átmegyek a hálóra (játsszák a dia szerepét).
1. a) A metszetek festése a nehézfémek (ólom, volfrám, urán) sójának segítségével kontrasztosodik.
b) Ezek a sók a membránfoszfolipideken kicsapódnak és felszívják az elektronokat.
2. Ezért a cella megfelelő helyei sötétebbek lesznek.
Kézikönyv a gyakorlati készségek a hallgatók hallgatók a Department of Hisztológia