Vektorrendszerek a génsebészetben, azok jellemzői és alkalmazási elvei
Vektor - egy DNS-molekula, amely képes önállóan replikálódó sejtekben különböző organizmusok, és reprodukciós (klónozás) és zárt (kifejezés) ágyazott meg mesterségesen bármely gén. A géntechnológia első sikeres vektor-járműje a pSC101 gyűrűs plazmid volt. Ez hordozza egy hasítási helyet restrikciós enzimmel EcoR1 és alakítjuk hatása alatt ez az enzim a gyűrűt egy lineáris molekula, amelynek végei lehetnek „leesik” egymás között, ez hordozza egy antibiotikum rezisztencia gént tetraciklin rezisztencia, és így könnyen kimutatható baktériumokban. A pSC101 ezen tulajdonságait az első hibrid DNS létrehozására és klónozására használjuk. PBR322 plazmid. azt több területen kell vágni különböző restrikciós enzimekkel, lehetőség van a „varrni” a különböző DNS-fragmensek az ő két marker kiválasztásához bakteriális média: Amellett, hogy a tetraciklin, a plazmid kódolja több ampicillinrezisztenciát. Ha ezek közül a gének (például, a tetraciklin rezisztencia gén) hasítottuk restrikciós enzimre specifikus, amikor beágyazás helyén idegen DNS integritás megbomlik génfragmens és a kijelölt őket jelzés eltűnik. Ez lehetővé teszi a hibrid plazmidok kiválasztását. Transzformált E. coli baktériumok, azaz E. tartalmazó hibrid plazmidok nőnek tartalmazó táptalajon ampicillin, de nem nőnek a közeg két antibiotikummal, mert tetraciklin rezisztencia gén a plazmidinszertekből sérült. A szelektív növekedés lehetővé teszi a hibrid DNS molekulákat tartalmazó sejtek kiválasztását és növekedését. Gene lacZ. amelyben egy polilinker vagy 10 restrikciós helyet tartalmazó hely található. Bakteriális telepek tartalmazó normál és sérült könnyen be gének különböznek ha tesz a sejteket Petri-csészékbe szerdán. Ha ezeken a baktériumsejtekben kék színű kolónia alakul ki, a plazmidok nem tartalmaznak idegen DNS-betétet. Baktériumsejtek, amelyek plazmidokat tartalmaznak beágyazott DNS-sel, festetlen kolóniákat képeznek. A lacZ-hez hasonló géneket riporternek neveznek.
A plazmidokon kívül a fágot és a vírusokat is vektorokként alkalmazzák. Később kozmidokat hoztak létre - a vektorok speciális típusa, amelyek kombinálják a plazmid és a fág tulajdonságait.
A szükséges gének megszerzésének módszerei a géntechnológiában. Gén bankok létrehozása.
Külföldi gének bevezetése a sejtekbe és kifejeződésük szabályozása.
A plazmid bevezetett sejteket bevezetjük befogadó sejtekbe genetikai transzformációval (transzformálása Escherichia coli sejtek). Az 1970-es években. A kompetens sejtek előállítására olyan eljárást fejlesztettek ki, amely kalcium-klorid alkalmazásával baktériumokba bocsátja a DNS-t. Az elektroforézist elvén alapul a mozgó az elektromos mező-kibocsátás az egyik pólus a másik ütemben függő méretük (lehetővé teszi, hogy figyelemmel kíséri a helyzet a DNS-t a gél). Otklonirovannuyu vektorokban teljes genomiális DNS-t vagy ezek kombinációja az egyes gének organizmus nevezett bank vagy könyvtárának gének. Izolált és tisztított genomiális DNS-t a sejtek, akkor van kitéve fragmentáció restrikciós enzimek segítségével, majd a klónozott rekombináns molekulák. A bank teljes vagy részleges lehet. A klónok száma a genom méretétől és a DNS-fragmensek méretétől függ. Az első gén bankot 1976-ban hozták létre. az E. coli esetében. A génbankok a szervezet génjeinek és fehérjékének szabályozását, szerkezetét és működését tanulmányozó anyag forrásaként szolgálnak. 1969-ben az allin transzport élesztő RNS génjét szintetizáltuk. 1976-ban Egy tirozin tRNS-gént tartalmazó Escherichia coli DNS-t szintetizáltunk. Megközelítések felfedezése és gének izolálása, a kiválasztási módszer a szelektív táptalajon, hibridizálás radiojelzett DNS-készítmény, izolálására gének is használhatók immunológiai eljárásokkal radioimmunoditektsii módszerrel.