Immunológiai reakciók kimutatására specifikus antigének - studopediya
agglutináció
Ezekben a reakciókban figyelembe szereplő antigénekkel részecskék formájában (mikrobiális sejtek, vörösvértestek és egyéb korpuszkuláris antigének), amely vannak ragasztva antitestek és csapadék.
A termelés agglutinációs (PA) igényel három összetevőből áll: 1) egy antigén (agglutinogén); 2) antitest (agglutinin), valamint 3) egy elektrolit (izotóniás nátrium-klorid oldat).
Ar + + AT = elektrolit agglutinálódnak
1. formálási indikatív agglutinációs (PA) az üveg azonosítása céljából coliform.
Egy bevont csúsztatható üveg cseppeket:
1 Csillag csepp - agglutináló szérumot a szerek vérhas;
2 csillag csepp - agglutináló szérumot az ügynökök a tífusz;
3 -ya csepp: - sóoldat (kontroll).
Adunk minden csepp a vizsgált tiszta tenyészet baktériumok. Vegyes.
Megjegyzés. pozitív - jelenlétében pelyhek agglutinátumot
negatív - ennek hiányában a agglutinálják pelyhek
Következtetés: A vizsgálandó baktériumokat a kórokozók a tífusz.
2. Figyelembe véve az eredményeket Phragmites. beállítva a botulinum toxin kimutatása.
A kórokozója botulizmus - Clostridium botulinum hét toxinok szerovariánsok (A, B, C, D, E, F, G), azonban, szerotípusnak A gyakrabban fordulnak elő, mint mások, B, E. Minden toxinok különböznek antigén tulajdonságait, és meg lehet különböztetni a reakciókban a típus-specifikus antiszérummal . Erre a célra lehet tenni a reakció passzív (közvetett) hemagglutinációs a szérummal a páciens számára, amelynek feltételezzük, hogy a jelenléte a toxin, és vörösvértest betöltve az antitoxikus antitestek protivobotulinicheskih szérumában típusú A, B, E. A vezérlés normális szérum.
Ábra. 3. formálási és RNGA eredményt.
Könyvelési. Pozitív esetben vvt rendezi az aljára a jól elkeverve sima sejtrétegek egy összehajtott vagy fogazott él (fordított esernyő), a negatív - lerakódnak a gombok formájában vagy ringlet.
Következtetés: A típusú botulinum toxin kimutatható volt a szérumban a beteg E.
Csapadék reakció - a formáció a csapadék oldható molekuláris komplex az antigén antitestekkel a felhőben, az úgynevezett csapadékot. Ez alkotja összekeverjük az antigén és az antitest ekvivalens mennyiségben. A reakcióelegyet fel a csapadék csövekben (határfelületi precipitin teszt), gélek, és más táptalajokon.
3. beállítása és tartása határfelületi precipitinreakciókat teszt meghatározására egy adott tartozékot a vérfoltokat.
Megállóhelyeken. A keskeny cső 0,5 cm átmérőjű №1 hígítatlan kicsapószerrel elleni szérumot emberi vér fehérjék mennyiségben 0,3-0,5 ml, tartva ferde helyzetben, egy Pasteur pipettával a falon lassan felhalmozódik az azonos mennyiségű antigénnel (vérfolt kivonat) . A csövet №2 öntjük pretsipitatsionnuyu elleni szérumfehérjék ram a csőbe №3 - fiziológiás sóoldat (kontroll), és még hozzá, mint az első cső antigén. A csöveket óvatosan, hogy ne keverjük össze a folyékony, beállított függőlegesen. A megfelelő rétegzési pretsipitinogena a szérum egyértelműen jelzi a határt a két réteg folyadék. Készítmény a reakció szükségszerűen kíséri kontrollok szérum és az antigén.
Könyvelési. A reakció eredményeit figyelembe veszik fajtájától függően az antigén és antitestek 5-10 percen belül, 1-2 óra, vagy 20-24 órán át. Abban az esetben, pozitív reakció a kémcsőben a felület között a szérumban és a vizsgálati kivonat csapadékot formájában jelenik meg a fehér gyűrűk.
4. meghatározása toxicitást Corynebacterium diphtheriae a kicsapásos reakciónak agar.
Ez már régóta használják a kicsapási reakció, javasolt, hogy meghatározzuk a toxicitási Corynebacterium diphtheriae, helyezni a foszfát-pepton agar egy Petri-csészébe. Valamint a közepén, teszünk egy csík steril szűrőpapíron, áztatott antitoxikus szérum. Szárítás után a parttól 1 cm-re a szélétől szalag 10 mm átmérőjű plakkok koca izolált tenyészetét. Egy csésze lehet vetni 3-10 kultúrák, amelyek közül az egyik, a vezérlő kell ismert toxikus. Növények kerülnek inkubátorba helyezzük.
Elszámolása reakciók keresztül folytatott 24-48-72 HR. Kultúra toxigén Ha, egy bizonyos távolságra a papírcsíkot kialakulni csapadékot vonal egybeesik a vonalak a kontroll tenyészet csapadék. Van egyfajta „antennák-nyilak”, amelyek egyértelműen áteső fényben látható.
Immunológiai reakciót kimutatása specifikus antitest
5. formálási közvetett hemagglutinációs (IHA) titere kimutatására specifikus antitestek a beteg.
A passzív hemagglutináció (PHA) alkalmazunk hordozóként eritrociták. Antigén betöltött eritrociták össze vannak ragasztva a specifikus antitestek jelenlétét egy adott antigén elleni, és csapadék. Az eritrocitákat érzékenyített antigén használható az TPHA eritrocita diagnosztikum antitestek detektálására (szerodiagnosztizálására).
Megállóhelyeken. A lyukakat polisztirol előállított lemezek egy sor egymást követő szérum hígítások. Az utolsó előtti jól hozzájárulnak - 0,5 ml ismert pozitív szérummal, és végül 0,5 ml fiziológiás sóoldattal (kontroll). Ezután az egyes üregekhez hozzáadunk 0,1 ml hígított eritrocita Diagnosticum, összerázzuk és inkubátorba helyezzük 2 órára.
Könyvelési. Pozitív esetben vvt rendezi az aljára a jól elkeverve sima sejtrétegek egy összehajtott vagy fogazott él (fordított esernyő), a negatív - lerakódnak a gombok formájában vagy ringlet.
Ábra. 6. Eredmény RNGA. Antitest-titer - 1: 100.
6. formálási telepített agglutinációs teszt kimutatta a specifikus antitest titer a betegnek.
Expanded RA számára szerodiagnosztizálására helyezzük a betegek szérum. Ez növényi és az izotóniás nátrium-klorid-oldattal 1:50 - 1: 100 és 1: 800 vagy 1: 1600. Mivel az alacsonyabb titereket lehet normál szérum agglutinineket hozzáférhető egészséges egyének vagy betegek más diagnózis (diagnosztikai titer). Mivel az antigén ebben a reakcióban alkalmazott diagnosticums - nyilvánvalóan ismert zagyot általában elölt baktérium, amely biztonságos működését.
Tedd a reakció az alábbiak szerint. Az agglutinációs kémcsövek előre adagolt 1 ml izotóniás nátrium-klorid oldat. Az első egy készült fel 1 ml-re hígított szérum 1: 100, és keveredését, 1 ml-t átviszünk egy második, a második - a harmadik, stb A kapott két-szeres hígítású szérumot (1: 100-tól 1: 1600 vagy több) adunk 1-2 csepp baktériumszuszpenziót tartalmazó 3 milliárd mikrobiális szervek 1 ml. A csöveket összeráztuk, és helyezzük termosztátban 37 ° C-on 2 órán át állni hagytuk, majd nap szobahőmérsékleten.
Elszámolása telepített agglutinációs reakciókban értékelő mindegyik csőbe egymás után, kezdve a kontroll, enyhe rázatás közben. Az agglutinációs kémcsövek nem kell. Az intenzitás a agglutinációs jegyezni alábbi jelek: ++++ - teljes agglutináció (agglutinátumot pelyhek abszolút átlátszó folyadék); +++ - teljes agglutináció (slaboopalestsiruyuschey forgácsot egy folyadék); ++ - részleges agglutináció (világosan kivehető pelyhek, enyhén zavaros folyadék); + - gyenge, kétséges agglutináció - egy nagyon zavaros folyadék, pehely nehezen látható; - - Nincs agglutináció (egyenletesen zavaros folyadék).
Mert szérumtitere elviszi az utolsó tenyésztés. ahol az intenzitás a agglutináció becsült nem kevesebb, mint két plusz (++)
