Kimutatási módszereket a vírus sejttenyészetben

A létezése és a szaporodás a vírus a sejtekben által elismert úgynevezett citopátiás hatást: eredményeként szaporodását a vírus sejtek elhalnak, és a mikroszkóp alatt látható degeneratív változások a sejtekben. Rétegek fertőzött sejteket kibújt falától a cső vagy a fiolába. Mivel a sejtek növekedését megszűnik, a közeg pH-ja keveset változik, mint a kontroll (nincs vírus sejtek).

1. A fejlesztés egy specifikus sejt-degeneráció - néz a mikroszkóp alatt: a kialakulását polinukleáris óriás sejtek, kerekítés, sejtproliferáció gócok.

2. kimutatása intracelluláris zárványok - a citoplazmában vagy sejtmagban (foltos, és nézd a mikroszkóp alatt).

3. kimutatása Ag-specifikus immunfluoreszcencia.

4. Pozitív reakció gemadsorbtsii.

5. A pozitív reakció a hemagglutináció.

6. A plakk-képződés - jelennek elszíneződött területeket a kultúra, tagjai az elhalt sejtek - a kolónia a vírus. Festettük vörös festékkel - plakkok kerek, fény.

Sejtkárosító hatás meghatározása, osztályozása.

CPE - degenerációja sejtek hatása miatt a vírus szaporodni kultúra szövetben. Mikroszkópos citopatikus hatás expresszálódik különböző sejtek morfológiája változások, a kialakulását óriás többmagvú sejtek (symplasts) pycnosis magok, és végül, a teljes sejtek pusztulását. Makroszkóposan észrevehető hámlásáért a sejteknek a cső falán. A természet a celluláris degeneráció elsősorban attól függ, hogy milyen típusú vírus.

12. módszerei tipizálására vírusok:

Típusának meghatározásában vírus virusosoderzhaschem anyagi alapját, hanem a semlegesítés a vírus típus-specifikus szérumok. A végeredmény a reakció lehet beállítani alapján az alábbi szolgáltatásokat:

2) a reakcióelegyet semlegesítjük gemadsorbtsii;

4) a késleltetést (fékezés) a hemagglutinációs;

5) megvilágítás tartalmazó sejtek a vírus, hatása alatt a fluoreszcens tipospetsifiacheskih szérumok;

6) semlegesítés egy állatkísérlet.

ÖSSZEFOGLALÁS gemadsorbtsii reakciót.

Gemadsorbtsiya - adszorpció a vörösvértestek felszínén fertőzött sejteket a vírus.

Módszer reakciót. A csöveket a vírussal fertőzött szövettenyészet készült 0,2 ml 0,4% -os szuszpenzió eritrociták. A csöveket összeráztuk, és ferde helyzetben. A érintkezés időtartama erit-sejtek függ az inkubációs hőmérsékletet és a vírus típusától. Elszámolása végzett reakcióban a kis nagyítás mikroszkóp után egy rövid lengő cső elválasztására nem adszorbeált eritrociták a sejt felszínén. Amikor a vírus gemadsorbtsii vörösvértesteket szilárdan a sejteket, és a rajtuk tárolt után 1-2 alkalommal a mosást. Felületén adszorbeált a vírussal fertőzött sejtek, vörösvértestek alkotnak jellemző klaszter.

A módszer lényege a színes minták.

Színes reakciót. Az alapot a reakció szükséges az a tény, hogy a savas anyagcsere termékek felhalmozódnak a folyamat a szaporodást és a növekedést a sejttenyésztő közegben, a pH csökkentésével. A szövetet vírussal fertőzött, a degeneráció a sejtek fordul elő, amelynek értelmében a metabolizmusuk van nyomva, és nincs mérhető nenie-pH-jú környezetben. Azonosítani ezeket változások a tápoldatot adtunk fenolvörös indikátort. PH = 7 feletti, a jelző piros pH 7 - narancs és egy pH 7 alatti - sárga.

Ha a sejteket nem fertőzött a vírussal (vagy semlegesítjük specifikus szérum) táptalajban pH eltolódik a savas oldalig, és a sárga színű lesz. Abban az esetben, reprodukció a vírus sejtek degenerálódnak és a közeg megtartja az eredeti vörös színét.

Eljárás színes mintát lehet titrálásához használt VEE-tier vagy virusneytraliziruyuschih antitestek.

A módszer lényege a plakkok.

A módszer azon alapul, a megjelenése egy egyrétegű vírus-fertőzött sejtek elszíneződése, amely a degenerálódott sejtek. Ezek a területek, úgynevezett plakkok, képviseli a kolónia a vírus, ami egy vírus részecske.

A módszer a következő. Egy speciális üveg fala egyrétegű sejttenyésztő tápközeget ezután eltávolítjuk. Sejtek már fertőzött és öntjük agar tartalmazó semleges vörös indikátor. Ott, ahol a sejtek növekedését, a környezet megváltozik a savas irányba, és a jelző rózsaszín. Azokon a területeken, ahol a sejteket elpusztítják a vírust, a közeg pH-t és ezért nem változik a színe a mutató. Az ilyen szigetek festetlen közegben fehéres plakkok.

A lényege hemagglutinációs dlyaobnaruzheniya vírusok.

A mikrobiológiai diagnosztizálására vírusfertőzések.

1.Virusoskopichesky - kimutatjuk egy vizsgálati anyagot elektronmikroszkóp segítségével módszerek segítségével virionok vagy intracelluláris zárványok fény optikai mikroszkóppal.

2.Obnaruzhenie vírusok felhasználásával immun mikroszkópos technikákkal.

3.Virusologicheskie módszerek - izolálását tiszta tenyészeteinek vírus sejttenyészetek alkalmazásával vagy csirke embriókat.

4.Serologicheskie módszerek - kimutatására vírusellenes ellenanyagok beteg vagy lábadozó szérum vítusneutralizációval reakciók, komplementkötési reakció, hemagglutináció gátlási reakció immunszorbens módszerrel (IPM), radioimmunoassay technikával (RIM), a passzív hemagglutináció (PHA), hemagglutináció immun adhéziós (AH + aT komplex jelenlétében komplement adszorbeált eritrociták), precipitin reakciók agar imlunofluorestsentnogo módszerrel. Elvileg ezek a reakciók is kimutatására használt vírus en Tigeneh.

5.Biologicheskie módszerek - megfertőző fogékony a vírus laboratóriumi állatokban annak érdekében, hogy reprodukálja a betegség vagy az azt követő vírus izolálása.

Mi virusoskopichesky diagnosztikai módszer.

Anyaga a orrnyálkahártya, garat emulgeált sóoldatban, és a visszamaradó anyagból kicsapjuk készítsen keneteket.

Stroke, majd szárítás után kezeljük a típus-specifikus antiszérumokkal és lyuminestsiruschimi mikroskopiruyut fluoreszcens mikroszkóppal th. A sejteket, amelyek a megfelelő vírus adszorpciós ruyut-specifikus antitest, és a lumineszcens fény.

Mi virológiai diagnosztikai módszer.

Fertőzés csirke embriók a magzatvízben vagy allantoisüregébe. A vírus kimutatható a reakció-GEMAG glyutinatsii, tipiruyut keresztül HAI Infection szövettenyészetben. A szövettenyészetben a vírust kimutatni citopátiás hatás, amit színváltozás a közepes és gamadsorbtsii reakció; tipiruyut HAI, semlegesítő és CPE gemadsorbtsii reakciót. Fertőzés fehér egerek. Tipiruyut Motodom vírusneutralizációs specifikus antiszérumokkal.

A vírusfertőzés típusai.

1.Virusy neprodolzhit marad a vírus a szervezkedési

-akut; -bessimptomnaya; -abortativnaya fertőzés

2. A vírusok továbbra is a vírus marad a szervezetben

-látens; -Hronicheskie; lassan

Jellemzők és mechanizmusai antivirális immunitás.

1. A tevékenység citotoxikus T-limfociták (killer T-sejtek) és ölősejtek, stb

2. Az aktivitás az interferon rendszer

3. Az oktatási rendszerek virusneytraliziruyuschih

perzisztencia mechanizmusok vírusok a szervezetben.

1. A vírus egy hibás állapotban, ez nem képes szaporodni, és immunválaszt indukál hatása

2. A vírus a sejt, mint a szabad genomi nt-te, a be nem avatkozás antitestek

3. A vírus genom integrálódik a kromoszómába a célsejt (virogen)