A hatás az angiogenezis faktor morphofunctional állapotban infarktus patkányokban kísérleti
Jelenleg, a terápiás lehetőségek közé tartozik a CHD kezelés hatása a klinikai tüneteket, a betegség, és csökkenti a szívinfarktus veszélyét, szívhalál egyenlőtlenségének csökkentése a szívizom oxigénigényét és szállítás, megelőzésére a betegség progresszióját, helyreállítása a koszorúér véráramának a koszorúér angioplasztika vagy revaszkularizációs a szívizomban. Fejlődés ellenére a kezelés a koszorúér-betegség, a halálozási arány ebben a betegségben továbbra is magas, amely előírja, hogy az új megközelítés a kezelés a koszorúér-betegség. A génterápia, különösen a használata angiogén növekedési faktorok potenciális új kezelés a szívbetegségek. Az elmúlt években voltak számos kísérleti vizsgálatok az angiogenezis faktorok, és az első klinikai kísérleteket a betegeknél a koszorúér betegség és perifériás érbetegség [3, 5]. Az angiogenezis egy komplex többlépéses folyamat kialakulásának révén új véredények bimbózó vagy törés (felosztása) a meglévő [2, 4]. Az angiogenezis számos egymást követő szakaszból áll: 1) vazodilatáció, 2) a migráció és adhéziót az endotéliális sejtek szaporodását és 3) önmagában képező háromrétegű érfal új vaszkuláris csöveket, hogy fejleszti a keringő helyreállítási [4]. A vérerek képződését nagyobb, mint a kapillárisok szükséges migráció a simaizomsejtek és azok tapadását az újonnan formázott mátrix az új erek. A kísérletben, a módosítása a következő lépéseket is stimulálják és gátolják az angiogenezist. Közül számos tényező szabályozásában vesz részt az angiogenezis, a legfontosabb a vaszkuláris endoteliális növekedési faktor, a VEGF (vaszkuláris endoteliális növekedési faktor - VEGF) és annak homológjai [4]. VEGF, hogy jelentős angiogenézis induktor, egy glikoprotein, növeli a vaszkuláris permeabilitás, szelektív kifejtése mitogén hatása van az endotéliás sejteken, ez által termelt endoteliális sejtek hipoxiás körülmények [1, 3]. Az expressziós szintje VEGF progresszíven csökken a születés után, és minimális a legtöbb felnőtt szövetekben, kivéve a helyeken az aktív angiogenezis - mint például a petefészek, a méh, a bőr (szőrnövekedés). Magas szintű VEGF a tüdő felnőtteknél összefüggésben lehet endoteliális Nyílászáró [3]. Azonban a VEGF-expresszió lehet aktiválni bizonyos feltételek mellett - mint például a jelenléte a miokardiális iszkémia, retina gyulladás, tumor [1; 9; 10; 12].
A szívizom kapilláris hálózat fontos szerepet játszik a közlekedési oxigén és a tápanyagok az szívizomsejtek. Megnövekedett kapilláris sűrűség a szívizomban biztosít magasabb aktivitást miokardailnogo véráramlást, miokardiális perfúzió és anyagcsere ischaemia. Megváltoztatása a sűrűség és a felszíni csererendszert mikrokeringési kapilláriscsatornás lehet indukálni egy angiogenezis folyamatában.
A tanulmány célja az volt, hogy vizsgálja meg a hatása a VEGF-164 a növekedés és fejlődés, valamint a sérült állapotban gemomikrotsirkulyatsii infarktus által okozott elzáródását elülső leszálló ágát a koszorúér a peri-infarktus, és távoli a központi területeit a szívizom a kísérletben.
A kísérleteket hozott 22 fehér korcs hím patkányok 200-250 g súlyú. Az első csoport 6 állatból álltak intakt patkányokban, egy második csoport (n = 8) - Kontroll állatok, amelyeket termelnek koszorúér elzáródás peredneniskhodyaschey. A harmadik csoport a vizsgálati állatok (n = 8) adtunk be intravénásán előre VEGF-164 készítményt dózisban 0,3 mg / kg, és készített egy koszorúér elzáródása.
Előállítás VEGF, ami egy polipeptid, amely a 164 aminosavból, adjuk be egy dózisban 0,3 mg / kg után, hogy feloldjuk 1 ml pufferben, és 5 percen át centrifugáljuk. A gyógyszert intramiokardiális.
Kísérleti myocardialis necrosis által reprodukált elzárása a bal elülső leszálló koszorúér (LCA) a bal sternotómia alatt Nembutal érzéstelenítés (i.p., 40 mg / kg), egy gépi lélegeztetés. Injekció előtt érzéstelenítő az állatoknak atropin 0,04 m 2 / kg, hogy megakadályozzák nyálkahártya ödéma intubálnak. Lefejezés után a 7. napon elzáródás után alá Nembutal érzéstelenítés.
Ahhoz, hogy tanulmányozza a morfológiai állapotban a szívizom használt hagyományos módszerrel megfestettük.
Hemomicrocirculatory csatorna mikroszkopikus tanulmányoztuk miokardiális kezelt preparátumokban módosított módszere Gomori S.A.Sisakyanu [7]. A szemlencse mikromérő mért átlagos átmérője a kapillárisok (d), számolt sűrűség (teljes hossza - L), a csere felületet kapillárisok (DIC) és a kapacitás a kapilláris ágy (ERC) 1 mm-3 a miokardiális szövetben.
A statisztikai analízist Student t-kritérium.
Adataink azt mutatták, hogy a 7. nap után a zárványként elhalásos gócok találtak jelentős számú nekrotikus sejtek és izolált töredékei a kapillárisok, mivel a beadás után a VEGF vaszkuláris válasz még kifejezettebb volt.
Abban a vizsgálatban, a hajszálér a miokardium intakt állatok azonosítottak képest párhuzamos és egyenletesen megtöltött kapillárisok, valamint a keresztirányú barázdák szívizomsejtek (ábra. 1).
Ábra. 1. A miokardium intakt állatok. Párhuzamosan elrendezett kapillárisok és keresztirányú barázdákkal az izomrostok. 7 x 40.
A kontroll állatokat jelenléte jellemzi a számos területén a fény, megfosztott vaszkuláris elemek. A szomszédos területek myocardialis necrosis észlelt sűrűn rendezett egyenlőtlenül töltött kapillárisok. Ugyanakkor a kapilláris falakat festett intenzívebb, sokan sodrott, szabálytalan kontúrok. Sok látóterek volt teljesen hiányzik keresztirányú barázdákkal izomrostok (ábra. 2). A miokardium kapott állatok VEGF észlelt sűrűbb elrendezése kapillárisok anastomiruyuschih egymással és alkotó egyfajta kapilláris hálózat területeken közvetlenül szomszédos nekrózis (3.). A távolabbi területeken a nekrózis kapillárisok párhuzamosak egymással, amelyek a helyes lépés sima kontúrok.
Ábra. 2. elzárása a bal fő koszorúér. Paranecrotic területen. Kontúrok kapillárisok durva, egyenetlen színező falak, hajszálerek alkotnak mikroanevrizmaticheskie bővítése. 10 x 40
Ábra. 3. Alakult miokardiális kapilláris hálózat szomszédos területeken a nekrózis utáni 7. napon szívkoszorúér-elzáródást. 10 x 40.
szinte nem különbözött a kontroll állatokban belül megbízhatósága (3,3%, p> 0,1) egy morfometrikus értékelési rendszer perinekroticheskoy kapilláris zóna átlagos átmérője kapillárisok .Otmechalos sűrűség növelésére működő kapillárisok (14,7%, p<0,05) и ОПК (12,1 %, р<0,05) в этих участках (табл.1). В более отдаленных отделах миокарда капилляры располагались параллельно друг к другу, их средний диаметр и количество функционирующих капилляров в пределах достоверности не отличались от таковых в перинекротической зоне.
1. táblázat
Morfometriai változások mikroérhálózatában szívizom perinekroticheskoy elzáródás zóna és alkalmazása LCA VEG
Paraméterek infarktus ICR
Megjegyzés: * p <0,05, достоверность разницы с интактными животными; #p <0,01 – достоверность разницы между животными с окклюзией ЛКА и животными, дополнительно получившими VEGF.
Abban a csoportban, kapott állatok az injekció előtti VEGF-164, említettük sűrűbb elrendezése a kapillárisok perinekroticheskoy zónában (24,8% -kal, p<0,01), так и в отдаленных от него участках. Морфометрические измерения показали отсутствие изменения среднего диаметра капилляров от таковых у контрольных крыс (2,8 %, р>0,1), de ez a szám a működő kapillárisok elérte szignifikánsan magas értékeket perinekroticheskoy területen (24,8%, p<0,01), так и отдаленных от него участках. Именно благодаря увеличению количества функционирующих капилляров наблюдалось значительное увеличение ОПК (25,1 %, р<0,01).
Az egyik ígéretes iránya a kísérleti kardiológia a miokardiális ischaemia kezelésére, a szív neovaszkularizációját segítségével az úgynevezett „angiogén” mediátorok indukáló hajó képződését. Miokardiális angiogenezis lép fel a szervezetben, és lehet ösztönözni akut ischaemia, ischaemiás prekondicionálás [1, 6]. A folyamat az angiogenezis kíséri indukciója aktiválása számos transzkripciós faktorok - Staf 3; SP-1, Pax-5 [4]. Számos tanulmány igazolta, hogy a fedezet érrendszer védelme az iszkémiás szívizom során akut szívkoszorúér-elzáródásos.
Jelenleg számos megoldatlan kérdés adagolási módszerek tekintetében a VEGF terápiás angiogenezis. A vizsgálatok az alkalmazás angiogén faktorok összekeverjük. Az első vizsgálatban a növekedést mutatott a terhelési tolerancia során intrakoronáriás beadásra protein bázikus fibroblaszt növekedési faktor (b-FGF) a 65 év feletti betegek súlyos angina. A Revasc randomizált vizsgálatban, 2 csoport a betegek súlyos angina beadását VEGF-121 álló gén adenovírus bal kamra után minitoranotomii megfigyelt jobb adatok futópad-teszt (megnövekedett idő megjelenése előtt a fájdalom) bekövetkezése előtt ST depresszió nagyobb, mint 1 mm) volt megfigyelhető a 26. héten [8]. Intravénás beadásra vagy a „disztális artériás véráram” angiogén növekedési faktorok is okozhat szisztémás reakciókat, például hajó növekedési tumorokba észrevétlenül, hipotenzió [2, 3]. Ebben a tekintetben is érdekes hatása intramiokardiális injekció VEGF elkerülése érdekében számos szisztémás káros mellékhatásokat. Tekintettel a fentiekre, az általunk tesztelt kísérleteinkben, akkor ez a módszer bevezetésének VEGF.
A kapilláris hálózat kulcsszerepet játszik a közlekedési oxigén és energia hordozók szívizomsejtek. Megnövekedett kapilláris sűrűség a szívizomban ischaemia alatt megfigyelhető, jelezve a fiziológiai relevanciáját gipoksiindutsirovannogo szint növekszik, endoteliális mitogének és receptoraik [2, 10]. Különösen, 24 óra után. A ligálás után a bal oldali koszorúartéria a kísérleti körülmények között állatmodellekben jelentős növekedést mutatott a VEGF-szint [12]. Ismeretes, hogy aktiválása endogén VEGF expresszió egy korai válasz miokardiális isémia. Ez a válasz végezzük molekuláris szinten, az egyik az első adaptációs mechanizmusokat myocardialis ischaemia [1, 3, 13].
A kísérletes modelljeiben nekrózis és az angiogenezis faktor VEGF terápiát azt találtuk, hogy a terápia faktort is aktiválja az úgynevezett angiogenezis folyamat perinekroticheskoy zóna és a távoli területeken nekrózis számának növelésével a működő kapillárisok és a hőcserélő felületeken a kapilláris ágy. A súlyossága a vaszkuláris válasz a 7. napon a kísérlet, a sűrű elrendezése a kapillárisok és a többszörös anasztomózisok jelezve aktiválása kollaterális a perinekroticheskoy zónában a kontroll csoportban a patkányok. Ezek a változások adaptív és adaptív mechanizmusok akut szívizom-ischaemia és leírásuk számos kísérleti vizsgálatok modellezésére miokardiális infarktus és a betegek AMI. Az egyik lehetséges mechanizmusok ezeket a változásokat az aktiválási endogén angiogenezis szívében számos növekedési faktorok. Előkezelés VEGF, szemben a kontroll állatoknál, ami növeli a sűrűsége az érrendszer, nemcsak perinekroticheskoy területen, de olyan területeken, távoli belőle.