Denaturáló reverzibilis - Referencia vegyész 21
Denaturáló lehet részlegesen reverzibilis, és a kinyert eredeti tulajdonságait - kvantitative különböznek. [C.211]
A vizsgálat alapját az izolálása és tisztítása a fehérjék ilyen tulajdonságok meghatározott fehérjék. például az oldhatóság, tölteni a rendelkezésre állás. molekulatömeg. Különbségeihez fehérje oldhatóságát alapú módszerek kisózással, nevezetesen A fehérjék kicsapása ammónium-szulfáttal vagy nátrium-klorid. Ilyen kicsapódást reverzibilis denaturáció, így például a fehérjék víz hozzáadásával újra oldjuk fel, és elveszítik natív tulajdonságait. [C.24]
Fölé hevítve a hőmérséklet fehérjék rejlő az élő szervezetekre. vagy amikor elhelyezik a szokatlan savas vagy bázikus körülmények között fokozatosan elveszti fehérjék jellemző másodlagos vagy harmadlagos szerkezet. Ebben az esetben a fehérje elveszti biológiai aktivitását. és azt mondják. ez denaturált. Ha denaturálási bevétel igen enyhe körülmények között, gyakran reverzibilis, azaz amikor visszatér a normális biológiai aktivitását a protein [c.449]
Magas koncentrációk karbamid vagy guanidin-hidrokloridot a vizes oldatban az teljesen denaturáció. amely egyes esetekben reverzibilis eltávolítása után a denaturálószer dialízissel. Jelzett denaturáló szereket széles körben használják, mert nagy koncentráció vizes oldatokban. A rendellenesség is okozhat bizonyos sóit [23], és (korlátozott mértékben) detergensek, például nátrium-dodecil-[24]. Több, mint széles általánosítás ezen a területen aligha lehetséges, mert egyes aminosavak funkciós csoportokkal az oldalláncokban volt megfigyelhető meglepetés, mint például a poli (L-benzil- -zu tidin) tartalmazó oldatokban kis mennyiségű egyszerű ásványi savak vesz egy rendezetlen konformációt, majd jelenlétében sztöchiometrikus mennyiségű perklórsav létezik formájában egy hélixet. Továbbá, azt jelentették [26], hogy a nátrium-dodecil- növeli a rendelési elasztáz enzim. kezdve egy meglehetősen alacsony szintű eltávolítása a detergenst dialízissel eredményez globuláris fehérje az előnyös p-formában. [C.433]
Tanulmányok kimutatták, hogy a nagy molekulatömegű vegyületek. elkülönül az oldatból kisózással. mosás után az elektrolitból lehet újra át az oldatba (a jelenség megfordítható). Kolloidok, hogy miközben kiküszöböli okozó tényezők koagulációs, képes mozogni államonként a szol-gél nevezzük reverzibilis kolloidok. Azonban, nagy molekulatömegű vegyületek irreverzíbilisen képesek kicsapódni, és bizonyos körülmények között. Ilyen irreverzibilis kicsapása nagy polimerek, különösen fehérjék, hatása alatt hő. RCT expozíciós tömény savak és lúgok, tanninok. sugárzó energia hívják dást. Amikor denaturáláshoz nem csak lerakódó polimerek. hanem megváltoztatják kémiai jellegüket. Fehérjék denaturációs válik oldódó és a legtöbb esetben elveszti a képességét, megduzzadnak. [C.383]
Számos megfigyelések azt mutatják, hogy a denaturálási visszafordítható. Sok fehérjék, mint például a hemoglobin, szérum albumin. tripszin és a kimotripszin. denaturált, majd tárolni oldatban, alacsony hőmérsékleten. megszerezni ismét (néha eltávolítása után a denaturáló ágens), az összes tulajdonságait az eredeti fehérje, nevezetesen az oldhatósági tartománytól, az a tendencia, hogy kristályosodni, 8H maszkolás bizonyos csoportok, és 8-8 és az enzimaktivitás. Bizonyos esetekben, akkor is vizsgálja az egyensúlyt a természetes és denaturált fehérje. Azonban, más esetekben, denaturálás után fordul elő mélyebb átalakulása a molekula, valamint egy visszatérés az eredeti állapot nem lehetséges (például a denaturáció tojásfehérje visszafordíthatatlan). [C.440]
Ezekben az esetekben is van, az úgynevezett összesítés denaturált fehérje - a jelenség igen elterjedt és többször vizsgálták. A limit aggregáció vezet teljes elvesztése oldhatóság - fehérje floc csapadék az oldatból, de tömény oldatokban - a gélesedés. Egy tipikus példa a fehérje, erősen aggregálódik denaturációs tojásalbumint. Néhány, fehérjedenaturációja jelenség visszafordítható. Általában ez a fehérje erősen gyógyítható diszulfid kötések. [C.85]
Azt is meghatározza, hogy az albumin denaturálási visszafordítható. változást okoz a pH. [C.457]
Ezáltal felmérve [14] Az optikai aktivitás -glut poli-aminosavak, és azt találtuk, hogy ha változik a pH 7,0-4,5 reverzibilis változás történik [a] 54b -120 ° -8 °. Ez együtt jár a változás az optikai forgatás. megfigyelt denaturációs bizonyos proteinek. [C.638]
A jelenség a reverzibilis fehérjék denaturálása fordul elő egy élő szervezetben is lehetséges, hogy ezek a folyamatok ábra. 92. változó alakja a polipeptid kapcsolt kölcsönös -lánc alakítjuk át az átmenetet a natív fehérje NCU aktív és inaktív (a) egy közbenső állapotban (b) formái az enzimet és a rendre-denaturált formában (a) vuyuschih hormonok és tak [c.212]
Amikor a határértékei pH a fehérje molekula elkezdi legombolyít, és azt mondják,. Ez elveszíti természetes tulajdonságait. Ez a folyamat lehet reverzibilis vagy irreverzíbilis természetétől függően a fehérje és annak feldolgozását. Denaturálása (veszteség a természetes tulajdonságait) gyakran visszafordíthatatlan, mivel kíséri jelentős csökkenése az oldhatóság és a fehérjét kicsapjuk az oldatból. A proteineket is melegítve denaturáltuk, még semleges pH, vagy karbamidot adagolunk (NGY) 2S0 vagy más anyagokat. amelyek gyengítik a kötvényeket, hogy tartsa a fehérje egy gömb alakú. [C.603]
Dást. protein makrostruktúra meghatározni nagyon kényes egyensúlyt a vonzó és taszító erők hatnak a biopolimer és a környező vizes közegben. Meg kell törni ezt az egyensúlyt, a teljes szervezeti felépítését a polipeptid, amellett, hogy az elsődleges. eltűnnek ppymi szó denaturálja. Mértékétől függően a zavar a szerkezet és a természet a fehérje denaturációt lehet reverzibilis vagy irreverzíbilis. A klasszikus példa egy irreverzibilis denaturálódását a protein egy koagulációs yaichiogo ha főtt tojás, amikor a tojás albumin (fehérje) megy keresztül termális kitekeredési. [C.412]
A szélsőséges esetben a szerkezeti változások - denaturáló fehérjéket. amelynek oka lehet melegítéssel vagy kezelésére különféle reagensekkel. mint például az erős savak és bázisok, karbamid. guanidin-hidroklorid és a nátrium-dodecil-szulfát. A denaturálást eredményez a telepítését a fehérjemolekula. és ez megy egy többé vagy kevésbé rendezetlen állapotban (itt szinte nincs spirálok, sem (3-rétegek, sem bármilyen más típusú rendszeres lánc csomagolási). A denaturált állapotban amid peptid-lánc csoportok hidrogénkötéseket képeznek a környező víz molekulák, például hidrogénkötések lényegesen nagyobb, mint intramolekuláris. a specifikus biológiai aktivitása a fehérje elvész denaturálás után, módosított és fizikai tulajdonságok., például ülepedési konstans változik. viszkozitását és fény abszorpcióját. a könnyű, amellyel termelőknek megy fehérje denaturációt. Az a tény, hogy elvben, reverzibilis denaturáció. arra utalnak, hogy a különbség az energia közötti hajtogatott konformáció és egy nyitott konformációjú a random coil kicsi. [c.105]
Egy másik példa az olyan együttműködési folyamat reverzibilis denaturálódását hajtogatott polipeptid láncok. Az érték a közeg pH-ja megoldások bizonyos fehérjék lehet csökkenteni körülbelül 4-sav hozzáadásával anélkül protonálódás csoportokkal. rejtett el benne a fehérje gömböcske. amelyre p / C> 4. A további hozzáadásával kis mennyiségű savat protonált legalább néhány a fő csoport. okozó, kibontakozó a polipeptid láncok és elérhetővé teszi protonozásához korábban rejtve a szerkezet több bázikus csoportot. Így, proton kötődését ebben az esetben olyan együttműködési folyamat. és ugyanúgy, mint a tiamin okozott együttműködési készsége konformációs változás. által okozott protonálódásának egy bizonyos csoport. [C.263]
Ami az oldható globuláris fehérjék (például a hemoglobin, az inzulin, gamma-globulin. Ovalbumin), az a kérdés, a természet a másodlagos szerkezet bonyolultabb. Adatgyűjtésre, amely szerint ebben az esetben az a-hélix játszik döntő szerepet. Az ilyen hosszú peptid láncok nem azonos szerkezetű, mint a teljes hossza az egyes részeik vannak hengerelve egy spirális, és viszonylag merev más részei hurkokat képeznek, sodrott véletlenszerűen és meglehetősen mobil. Azt találtuk, hogy egy fehérje denaturáló helikális régiók sodratlan, és lánc egészének szerez rendezetlen szerkezetet. (A tapasztalat azonban azt mutatja, hogy bizonyos feltételek mellett, és a előfordulása letekercselésének hélix lehet reverzibilis folyamat visszatér az eredeti protein másodlagos szerkezetét. Mivel ez a legstabilabb áramkörnél egy adott aminosav-szekvenciát.) [C.1061]
Az egyensúlyi denaturációs kezelés, a jelenség szigorúan véve, csak a reverzibilis dást. Denaturáló figyelhető meg a legtöbb esetben, a részben vagy teljesen [c.248]
Ez a fajta számítás lehetséges, természetesen csak abban az esetben, ha a denaturálási reverzibilis és az eredmények között a natív és denaturált fehérjék telepített állapotban váltvaforgató egyensúlyt. Kunitz alkalmazva ez a módszer kiszámító I obratilmy denaturációs tripszin inhibitor (szójabab fehérje), és úgy találta egyenlő +57 Ltd. CAL per 1 mol fehérje [188]. Egy másik módszer. Kistiakovskii használni. Ez alapján kalorimetriás meghatározására a következő két futamot reakciók [c.158]
Denaturálást és DNS renativatsiya. Hibridizációja DNS - DNS és a DNS - RNS-t. Dupla szálú DNS-szerkezet a melegítés során, extrém pH-értékek, karbamid feldolgozási válhat rendezetlen formában tekercsek - denaturált. Nukleinsavmolekulák elnyelik az ultraibolya maximuma 260 nm-nél, mivel az abszorpciós nitrogéntartalmú bázisok. A megoldás a natív DNS-260 nm-nél az optikai sűrűség 40% alatti az optikai sűrűség nukleotid-keveréket -. hyperchrom hatása. Ezért, denaturáció a DNS bírálják el a növekedés E250- Melegítéskor az abszorbancia 260 nm-en növekszik egy szűk hőmérséklet-tartományban (olvadáspont 80-85 ° C). Denaturáló visszafordítható, ha a baloldali spirális DNS oldalakon. Visszanyerése a DNS-szerkezetet eltávolítása után a denaturáló faktor (miatt komplementer bázispárosodás nukleotidok) nevezzük renativatsiey DNS. A jelenség a denaturálási renativatsii alapú hibridizációs módszer. [C.295]
Ábra. 4.3. Sematikus ábrázolása a konformáció a természetes fehérje és a folyamat a denaturálási. A megfelelő körülmények között denaturáltuk reverzibilis. A betűk N és C jelentése olyan KNa- és COOH koitsevym maradékok.
Denaturáló dshke reverzibilis teljes eltávolítása után a két áramkör. Amikor komplementer szálak vannak hőmérsékleten inkubáljuk körülbelül 25 ° C-kal alacsonyabb olvadási hőmérséklete a duplex eredeti, kezdenek újratársításához alkotnak egy hélixet kiindulási bizonyos feltételek mellett. Ezt a folyamatot nevezik adó-Renata vagy hőkezelés. [C.12]
Az ilyen átmenetek kopformatsioinye lizozim is találtak egy munkák száma más módszerekkel. Így a [157], a reverzibilis konformációs átmenetet a lizozim lúgos pH-tartományban szabályozzuk az ionos csoport pK-val 9.9. A [158] azt találták, hogy az alacsony pH-értékeken St. lizozim megy reverzibilis denaturáció, amelynek mértéke függ iopizatsii szabad karboxilcsoportok az enzim, amelynek pK a régióban 1,4-1,8. Szerint munkák ([159, 160]) a karboxilcsoport egy kórosan alacsony pK értéke Lásd oldalt, ahol a kifejezés reverzibilis denaturáció említettük. [C.194] [c.151] [c.593] [c.316] [c.249] [c.119] [c.54] Biochemistry 3. kötet (1980) - [c.263]
Alapjai Biological Chemistry (1970) - [c.152]
Immobilizált enzimek (1987) - [c.128]